移植肾功能减退患者肾组织中环孢素A测定及其意义

　1．1　临床资料　我院1988年至1998年间肾移植患者11例，临床表现为移植肾功能减退，其临床资料见表1，所有病例均在我院接受长期随访。以4例肾癌手术切除后的肾组织无癌区，(病理证实为正常肾组织)，作为对照组。对照组活检取材大小为0.4cm×0.6cm×0.7cm。实验组分别在B超引导下从移植肾上极、下极穿刺活检，组织块大小约为1.50cm×0.05cm×0.01cm，每例取2～3个组织块。活检组织用100 g／L的甲醛溶液固定，脱水，石蜡包埋，同时作HE染色。

　　1．2　试剂

　　1．2．1　P-gp混合单抗　JSB，C₂₁₉，C₄₉₄为丹麦DAKO公司产品，1∶50稀释。

　　1．2．2　环孢素A单抗　瑞士Norvatis公司产品。

　　1．2．3　其它试剂　EnVision　Kit为丹麦DAKO公司产品。

　　1．3　实验方法　石腊切片常规脱腊，PBS缓冲液冲洗，微波抗原修复，然后用3%H₂O₂阻断内源性过氧化酶，PBS洗3×3min，依次加入一抗（CsA单抗或P-gp混合单抗），4℃过夜，PBS洗3×3min，再滴加EnVision多聚物酶复合物孵育37℃ 30min。0.05%DAB+0.03%H₂O₂显色，苏木素复染，逐级脱水，透明封片，光镜观察。用PBS代替一抗作阴性对照，HE染色明确病理诊断。

　　1．4　免疫组织化学染色结果判定

　　1．4．1　P-gp表达　①?：50%以上的肾小管、肾小球细胞及小血管呈阳性表达；②?：25%～50％的肾小管、肾小球细胞及小血管呈阳性表达；③+：25%以下的肾小管、肾小球细胞及小血管呈阳性表达；④正常（－）：内散在个别阳性细胞，一般少于10％。

　　1．4．2　CsA表达　①?：50%以上的肾小管、肾小球细胞及小血管阳性；②?：25%～50％的肾小管、肾小球细胞及小血管阳性；③+：25%以下的肾小管、肾小球细胞及小血管阳性；④正常(-)：内散在个别阳性细胞，一般少于10%。

Table　1．　The　relevant　clinical　data　of　the　11　recipients　with　graft　dysfunction